Menu

ساعت کاری 09:00-17:00

تهران زیرپل سیدخندان خیابان میرمطهری پلاک 26 واحد7…

02186031084

MLPA

از آنجایی که در عصر حاضر تعداد فرزندان مبتلا به بیماری های ژنتیکی بیشتر شده است، روش های تشخیص و در نتیجه پیشگیری از این بیماری ها نیز همگام با پیشرفت علم، در حال گسترش است. من جمله می توان به تکنیک MLPA اشاره نمود.متاسفانه مهمترین عامل در نقص های ژنتیکی، جهش هایی است که در سطح ژنوم رخ می دهد و کشف این ژن های معیوب قبل از بارداری، کمک شگرفی به سلامت نسل بعد خواهد کرد. تکنیک  MLPA به کشف این موتاسیون ها کمک خواهد نمود.

MLPA

آشنایی با تکنیک MLPA:

به طور کلی از زمانی که  DNA کشف شد، متخصصین به دنبال روش هایی بودند که بتوانند جوانب مختلف ژنوم را مورد بررسی قرار دهند. با ساخت  PCR ، گام بزرگی برای تحقق این هدف برداشته شد. این دستگاه به بشر کمک نمود تا با دقت بالا و در کوتاه ترین زمان بتواند همانند سازی DNA را انجام دهد. با توجه به کارایی بالای PCR ، نمونه مختلفی از آن ساخته شد که MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) یکی از همین موارد است.

آشنایی با تکنیک MLPAدر سال 2002 در هلند تکنیک MLPA ابداع شد. این روش از جمله متدهای multiplex PCR است که کمک می کند تا:

  • با سرعت و دقت بالا بتوان توالی یابی DNA در سطح کمی را انجام دهیم.
  • گاهی اوقات، توالی های در ژنوم دیده می شود که تنها در سطح یک نوکلئوتید با یکدیگر تفاوت دارند. تکنیک MLPA  کمک می کند تا بتوان این توالی ها را تشخیص داد.
  • یکی از مهمترین کاربردهای تکنیک امکان تعیین موتاسیون های ژنی است که نقش مهمی در بروز بیماری های ژنتیکی دارد. در آزمایش های ژنتیکی که قبل از ازدواج انجام می گیرد، در صورتی که هر کدام از طرفین مشکوک به ناهنجاری در سطح ژنوم باشند، این آزمایش برای وی انجام خواهد گرفت.

مراحل انجام تکنیک MLPA :

اسا این روش، تکثیر کاوشگرها است با این هدف که بتوان تعداد کپی های ژن مورد نظر را تعیین نمود. مراحل کار به صورت زیر است:

  • دناتوره کردن DNA و هیبریداسیون

در این مرحله ابتدا باید دو رشته DNA  از یکدیگر جدا شوند. سپس این ترکیب، با کاوشگر های MLPA مخلوط و انکوباسیون می شوند. تمامی کاوشگرها دارای توالی های یکسان بوده و هر کدام از آن ها شامل دو نوع توالی – شامل توالی اختصاصی هدف و یکی از توالی های متصل شونده به پرایمر- و همچنین دو الیگونوکلئوتید جدا از هم هستند.

مخلوط DNA  با کاوشگرها باعث می شود که هیبریداسیون انجام گرفته و دو الیگونوکلئوتید در کنار هم قرار می گیرند و سپس بر روی هر کدام از رشته های DNA، به توالی هدف متصل می شوند. نکته بسیار مهم، تمایز قطعات تولید شده در الکتروفورز است. یکی یا هر دو نیم کاوشگرهای مورد استفاده دارای توالی stuffer هستند که طول آن ها در هر قسمت از کاوشگر با یکدیگر تفاوت دارند. همین موضوع عامل تفاوت خواهد شد.

  • مرحله اتصال یا ligation

در این مرحله باید دو پرایمر به یکدیگر متصل شوند. این عمل توسط آنزیم ligase-65 انجام می گیرد. آنچه که کمک می کند  بتواند جهش های نقطه ای را تشخیص دهد، قدرت عمل آنزیم لیگاز است.  در صورتی که عدم تطابق بین کاوشگر و توالی هدف وجود داشته باشد، این انزم عمل نکرده و در نتیجه نشان دهنده وجود جهش است.

  • انجام واکنش PCR

این مرحله شامل تکثیر رشته ها است که برای انجام آن به dNTPها و پرایمرهای forward و  reverse است. در صورتی که کاوشگرها از طریق پیوند کوالانسی به یکدیگر متصل شده باشند، امکان تکثیر وجود خواهد داشت. در PCR ، میزان محصولاتی که تولید می شود رابطه مستقیم با میزان DNA هدف اولیه دارد. این تعداد، معیاری برای تعیین تعداد توالی های هدف خواهد بود.

  • انجام الکتروفورز

نهایتا محصولاتی که تولید شده است در ژل الکتروفورز ران شده و براساس اندازه از یکدیگر جدا می شوند. نهایتا اطلاعات به دست امده برای بررسی های ژنتیکی مورد آنالیز قرار می گیرند.

تکنیک MLPAآنالیز نتایج به دست آمده از تکنیک MLPA :

برای تفسیر نتایج به دست آمده از تکنیک  نیاز به تخصص در این زمینه هست چرا که نتیجه، نقش بسیار مهمی در ازدواج و یا بارداری ایفا می کند. همانگونه که ذکر شده داده ها بر روی نمودارهایی ران می شوند. نمونه ای از تفسیر نتایج به شرح زیر است:

  • پیک های مربوط به ژن هدف را مورد بررسی قرار می دهند. وجود یا عدم وجود پیک در این ژن معیاری برای حذف هموزیگوت و یا هتروزیگوت خواهد بود.
  • زمانی که هتروزیگوت ها و یا ژن های مضاعف شده از ژنوم حذف شده باشند، محل پیک ها و حتی ارتفاع آن ها تغییر خواهد کرد.

مزایای تکنیک MLPA:

این روش به عنوان تکنیکی در آنالیز ژنوم انسان، دارای چند مزیت عمده است:

  • جالب است بدانید که هر بار آنالیز این روش، به ما اطلاعاتی در مورد حداقل 45 بخش از کروموزوم های مورد بررسی را ارائه می کند. در نتیجه بسیار دقیق و اختصاصی است و در آزمایش های ژنتیک زمانی که احتمال وقوع بیماری بسیار خطرناک و خاص وجود داشته باشد، استفاده از تکنیک MLPA کمک می کند تا نتیجه ای مطمئن را به دست بیاوریم.
  • از نظر هزینه نیز این روش به عنوان یکی از متدهای نسبتا ارزان شناخته شده است که یکی از دلایل آن، نیاز به تجهیزات کمتر است.
  • تکنیک MLPA دارای تکرارپذیری بالایی است و متخصصین همزمان چندین نمونه را مورد بررسی قرار می دهند.
  • این روش تغییر پذیری بالایی دارد. کافی است متخصصین کمی در پروتکل تغییراتی را اعمال نمایند تا بتوان تکنیک MLPA را برای انواع مختلفی استفاده نمود.
  • میزان DNA در این تکنیک زیاد نیست و لازم است بدانید که به هیچ عنوان نتایج نمونه ها به اندازه DNA بستگی ندارد.
  • همانگونه که قبلا ذکر کرده ایم، با این تکنیک می توان تعداد کپی های یک توالی را مشخص نمود.

محدودیت های تکنیک MLPA :

این روش زمانی می تواند نتایج معتبری را عرضه کند که با دقت بالا انجام شود:

  • تکنیک MLPA به ناخالصی ها حساس بوده و در صورتی که نمونه کوچکترین مشکل وجود داشته باشد، نتیجه ای مشاهده نخواهد شد.
  • این روش حساست زیادی به مواد آلوده کننده دارد.

 جهت دانلود فرم درخواست نمونه کلیک کنید:

فرم درخواست نمونه

× . سلام، چطور می تونم کمکتون کنم؟